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本试剂盒采用分光光度法以亚铁嗪为底物进行总铁结合力(TIBC)检测，进而反映缺铁性贫血。

将过量的铁加入待测血清、血浆中，使铁与多余的转铁蛋白结合，游离铁被铁吸附剂吸附除去，在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来，再被还原剂还原为Fe2+，后者与亚铁嗪生成紫红色化合物，通过分光光度计检测562nm处吸光度值，适用于检测血清、血浆样品中的总铁含量，即为总铁结合力(TIBC)。本检测方法属于直接检测法，应设血清空白，纠正血清本身的色度，根据公式计算出铁含量，该检测试剂盒在140μmol/L以下线性关系良好，甘油三脂≤3.39mmol/L，胆红素≤171μmol/L，对本法基本无干扰。

• 溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 实验过程中用到的水，不可用普通的蒸馏水，尽量采用高纯度的去离子水。
  
• 玻璃器材需要10%的盐酸浸泡24h，取出后用去离子水冲洗后才可以使用。
  
• 避免与铁器接触，以防铁污染。
  
• 标准品呈色24h稳定，血清呈色30min内稳定，随着时间的延长，颜色会慢慢加深，应在1h内比色完毕。
  
• 该法批内差异CV≤3.1%；批间差异CV≤2.6%。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

• 制备处理样品铁溶液和铁标准工作液：取适量的铁标准(100μg/mL)，按铁标准(100μg/mL)：TIBC铁标准稀释液=1:9的比例配制铁标准(10μg/mL)，作为处理样品铁溶液；同时按铁标准(100μg/mL)∶TIBC铁标准稀释液＝1∶49的比例配制铁标准(2μg/mL)，作为铁标准工作液；4℃避光保存，3个月有效。
  
• 制备样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于TIBC的检测。选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥有塞子的试管或者一次性无菌聚乙烯有盖子的离心管，加入血清或血浆0.45mL、铁标准(10μg/mL) 0.25mL、ddH2O 0.2mL，充分混匀，室温放置10min，加入铁吸附剂50mg，混匀，室温放置10min，期间振荡4次，3000g离心10min，取上清液，待用。
  
• TIBC加样：选用经稀盐酸处理及去离子水清洁的干燥试管或者一次性无菌聚乙烯离心管，按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的铁离子含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
  

  加入物(mL)	空白管	标准管	测定管
  ddH2O	0.45	—	—
  铁标准(2μg/mL)	—	0.45	—
  上清液	—	—	0.45
  TIBC Assay Buffer	1.2	1.2	1.2
  混匀，于562nm处，以空白管调零，读取测定管的吸光度(A 血清空白)。
  亚铁嗪显色液	0.05	0.05	0.05

• TIBC测定：混匀，室温静置15min或37℃孵育10min，以空白管调零，分光光度计562nm处检测标准管、测定管的吸光度(即为A_标准，A_测定)，1h内比色完毕。